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聚合酶链式反应(PCR)
时间:2016-12-13 12:37来源:文库分享网 作者:wkfxw.com 点击:

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。

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聚合酶链式反应(PCR)


工具/原料

1.扩增缓冲液,四种dNTP,引物,模板DNA,Taq DNA聚合酶, Mg离子,蒸馏水

方法/步骤

模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;

聚合酶链式反应(PCR)

模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;

聚合酶链式反应(PCR)

引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。

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